Co je elektroforéza na polyakrylamidovém gelu?

Elektroforéza v polyakrylamidovém gelu

Gelová elektroforéza je základní technika v laboratořích napříč biologickými obory, která umožňuje separaci makromolekul, jako je DNA, RNA a proteiny. Různá separační média a mechanismy umožňují účinnější separaci podskupin těchto molekul využitím jejich fyzikálních vlastností. Zejména u proteinů je často metodou volby elektroforéza na polyakrylamidovém gelu (PAGE).

PAGE je technika, která odděluje makromolekuly, jako jsou proteiny, na základě jejich elektroforetické mobility, tj. schopnosti analytů pohybovat se směrem k elektrodě s opačným nábojem. V PAGE je to určeno nábojem, velikostí (molekulární hmotností) a tvarem molekuly. Analyty se pohybují póry vytvořenými v polyakrylamidovém gelu. Na rozdíl od DNA a RNA se proteiny liší v náboji podle začleněných aminokyselin, což může ovlivnit, jak fungují. Aminokyselinové řetězce mohou také tvořit sekundární struktury, které ovlivňují jejich zdánlivou velikost a následně to, jak jsou schopny se pohybovat póry. Někdy může být proto žádoucí denaturovat proteiny před elektroforézou za účelem jejich linearizace, pokud je vyžadován přesnější odhad velikosti.

STRÁNKA SDS

Elektroforéza na polyakrylamidovém gelu s dodecylsulfátem sodným je technika používaná k separaci proteinových molekul o hmotnosti 5 až 250 kDa. Proteiny jsou separovány pouze na základě jejich molekulové hmotnosti. Dodecylsulfát sodný, aniontová povrchově aktivní látka, se přidává při přípravě gelů, které maskují vnitřní náboje proteinových vzorků a dává jim podobný poměr náboje k hmotnosti. Jednoduše řečeno, denaturuje proteiny a dává jim negativní náboj.

Nativní STRÁNKA

Nativní PAGE je technika, která využívá k separaci proteinů nedenaturované gely. Na rozdíl od SDS PAGE se při přípravě gelů nepřidává žádné denaturační činidlo. Výsledkem je, že separace proteinů probíhá na základě náboje a velikosti proteinů. V této technice jsou konformace, skládání a aminokyselinové řetězce proteinů faktory, na kterých je separace závislá. Proteiny se při tomto procesu nepoškodí a po dokončení separace je lze získat zpět.

Jak funguje elektroforéza na polyakrylamidovém gelu (PAGE)?

Základním principem PAGE je separace analytů jejich průchodem přes póry polyakrylamidového gelu pomocí elektrického proudu. Za tímto účelem se směs akrylamidu a bisakrylamidu polymeruje (polyakrylamid) přidáním persíranu amonného (APS). Reakce, která je katalyzována tetramethylethylendiaminem (TEMED), vytváří síťovitou strukturu s póry, kterými se mohou analyty pohybovat (obrázek 2). Čím vyšší je procento celkového akrylamidu obsaženého v gelu, tím menší je velikost pórů, a tím menší jsou proteiny, které budou schopny projít. Poměr akrylamidu k bisakrylamidu také ovlivní velikost pórů, ale často zůstává konstantní. Menší velikosti pórů také snižují rychlost, jakou jsou malé proteiny schopny procházet gelem, čímž se zlepšuje jejich rozlišení a zabraňuje se jejich rychlému stékání do pufru při použití proudu.

Zařízení pro elektroforézu v polyakrylamidovém gelu

Cela pro gelovou elektroforézu (nádrž/komora)
Gelový tank pro elektroforézu na polyakrylamidovém gelu (PAGE) se liší od tanku s agarózovým gelem. Nádrž na agarózový gel je horizontální, zatímco nádrž PAGE je vertikální. Pomocí vertikální elektroforézy (nádrž/komora) se tenký gel (normálně 1,0 mm nebo 1,5 mm) nalije mezi dvě skleněné desky a namontuje se tak, že spodní část gelu je ponořena v pufru v jedné komoře a horní část je ponořena v pufru v jiné komoře. Když je aplikován proud, malé množství pufru migruje gelem z horní komory do spodní komory. Se silnými svorkami, které zaručují, že sestava zůstane ve vzpřímené poloze, umožňuje zařízení rychlé běhy gelu s rovnoměrným chlazením, což vede k výrazným pásům.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) vyrábí řadu velikostí elektroforézních cel na polyakrylamidovém gelu (nádrže/komory). Modely DYCZ-20C a DYCZ-20G jsou vertikální elektroforézní cely (nádrže/komory) pro analýzu sekvenování DNA. Některé vertikální elektroforetické cely (nádrže/komory) jsou kompatibilní s blotovacím systémem, jako model DYCZ-24DN, DYCZ-25D a DYCZ-25E jsou kompatibilní se systémem Western blotting model DYCZ-40D, DYCZ-40G a DYCZ-40F, které se používají pro přenos molekuly proteinu z gelu na membránu. Po elektroforéze SDS-PAGE je Western blotting technika k detekci specifického proteinu v proteinové směsi. Tyto blotovací systémy si můžete vybrat podle experimentálních požadavků.

Elektroforéza Napájení
Chcete-li zajistit elektřinu pro provoz gelu, budete potřebovat napájecí zdroj pro elektroforézu. V Liuyi Biotechnology poskytujeme řadu napájecích zdrojů pro elektroforézu pro všechny aplikace. Model DYY-12 a DYY-12C s vysokým stabilním napětím a proudem dokáže splnit požadavky na vysokonapěťovou elektroforézu. Má funkci stojánku, časování, VH a aplikaci krok za krokem. Jsou ideální pro aplikaci IEF a DNA sekvenační elektroforézu. Pro obecnou aplikaci elektroforézy proteinů a DNA máme model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 atd., což jsou také horké prodejní zdroje s elektroforézou (nádrže/komory). Ty lze použít pro aplikace elektroforézy středního a nízkého napětí, jako jsou školní laboratoře, nemocniční laboratoře a tak dále. Další modely napájecích zdrojů naleznete na našich webových stránkách.

Značka Liuyi má v Číně více než 50letou historii a společnost může poskytovat stabilní a vysoce kvalitní produkty po celém světě. Díky letitému vývoji si zaslouží vaši volbu!

Pro více informací o nás nás prosím kontaktujte emailem[e-mail chráněný] or [e-mail chráněný].

Odkazy na Co je elektroforéza na polyakrylamidovém gelu?
1. Karen Steward PhD Elektroforéza na polyakrylamidovém gelu, jak to funguje, varianty techniky a její aplikace