Minulý týden jsme sdíleli několik úvah o použití membránové elektroforézy s acetátem celulózy a toto téma zde dnes dokončíme pro vaši referenci.
Výběr Koncentrace pufru
Koncentrace pufru používaná při membránové elektroforéze s acetátem celulózy je obecně nižší než koncentrace používaná při papírové elektroforéze.Běžně používané pH 8,6BArbitální pufr se typicky volí v rozmezí 0,05 mol/l až 0,09 mol/l.Při výběru koncentrace se provede předběžné stanovení.Pokud je například délka membránového proužku mezi elektrodami v elektroforetické komoře 8-10 cm, je zapotřebí napětí 25 V na centimetr délky membrány a intenzita proudu by měla být 0,4-0,5 mA na centimetr šířky membrány.Pokud těchto hodnot není během elektroforézy dosaženo nebo je překročeno, měla by být koncentrace pufru zvýšena nebo zředěna.
Příliš nízká koncentrace pufru bude mít za následek rychlý pohyb pásů a zvětšení šířky pásma.Na druhé straně příliš vysoká koncentrace pufru zpomalí migraci pásů, což znesnadní rozlišení určitých separačních pásů.
Je třeba poznamenat, že při membránové elektroforéze s acetátem celulózy prochází značná část proudu vzorkem, což vytváří značné množství tepla.Někdy může být zvolená koncentrace pufru považována za vhodnou.V podmínkách zvýšené teploty prostředí nebo při použití vyššího napětí se však může odpařování vody vlivem tepla zintenzivnit, což má za následek příliš vysokou koncentraci pufru a dokonce může způsobit vysušení membrány.
Objem vzorku
Při membránové elektroforéze s acetátem celulózy je množství objemu vzorku určeno různými faktory, včetně podmínek elektroforézy, vlastností samotného vzorku, barvicích metod a detekčních technik.Obecně platí, že čím citlivější je metoda detekce, tím menší může být objem vzorku, což je výhodné pro separaci.Pokud je objem vzorku nadměrný, elektroforetické separační vzory nemusí být jasné a barvení může být také časově náročné.Při kvantitativní analýze oddělených obarvených pásů pomocí elučních kolorimetrických detekčních metod by však objem vzorku neměl být příliš malý, protože to může vést k nižším hodnotám absorbance pro určité složky, což vede k vyšším chybám ve výpočtu jejich obsahu.V takových případech by měl být objem vzorku přiměřeně zvýšen.
Typicky se objem vzorku přidaný na každý centimetr linie nanášení vzorku pohybuje od 0,1 do 5 μl, což odpovídá množství vzorku 5 až 1000 μg.Například při rutinní elektroforéze sérových proteinů objem vzorku přidaný na každý centimetr aplikační linie obecně nepřesahuje 1 μl, což odpovídá 60 až 80 μg proteinu.Pokud však analyzujete lipoproteiny nebo glykoproteiny stejnou metodou elektroforézy, je třeba odpovídajícím způsobem zvýšit objem vzorku.
Závěrem lze říci, že nejvhodnější objem vzorku by měl být vybrán na základě konkrétních podmínek prostřednictvím série předběžných experimentů.
Výběr barvícího roztoku
Oddělené pásy při elektroforéze na membráně s acetátem celulózy jsou před detekcí typicky obarveny.Různé složky vzorku vyžadují různé metody barvení a metody barvení vhodné pro membránovou elektroforézu z acetátu celulózy nemusí být zcela použitelné na filtrační papír.
Existují tři hlavní zásady, pro které je třeba zvolit barvicí roztokmembrána z acetátu celulózy.Za prvé,Barviva rozpustná ve vodě by měla být upřednostňována před barvivy rozpustnými v alkoholu, aby se zabránilo smrštění membrány a deformaci způsobené barvicím roztokem.Po barvení je důležité membránu opláchnout vodou a minimalizovat dobu trvání barvení.Jinak by se membrána mohla zkroutit nebo smrštit, což by ovlivnilo následnou detekci.
Za druhé, je výhodné vybrat pro vzorek barviva se silnou afinitou k barvení.Při membránové elektroforéze sérových proteinů s acetátem celulózy se aminočerň 10B běžně používá kvůli své silné barvicí afinitě k různým složkám sérových proteinů a své stabilitě.
Za třetí by měla být vybrána spolehlivá kvalitní barviva.Některá barviva, přestože mají stejný název, mohou obsahovat nečistoty, které po obarvení vedou k obzvláště tmavému pozadí.To může dokonce rozmazat původně dobře oddělené pásy, takže je obtížné je rozlišit.
V neposlední řadě je důležitá volba koncentrace barvícího roztoku.Teoreticky by se mohlo zdát, že vyšší koncentrace barvícího roztoku by vedla k důkladnějšímu barvení složek vzorku a lepším výsledkům barvení.To však není tento případ.Vazebná afinita mezi složkami vzorku a barvivem má určitou mez, která se nezvyšuje s rostoucí koncentrací barvícího roztoku.Naopak příliš vysoká koncentrace barvícího roztoku nejen plýtvá barvivem, ale také ztěžuje dosažení jasného pozadí.Navíc, když intenzita barvy dosáhne určité maximální hodnoty, křivka absorbance barviva nesleduje lineární vztah, zejména při kvantitativních měřeních. Při membránové elektroforéze s acetátem celulózy je koncentrace barvícího roztoku obecně nižší než koncentrace používaná při elektroforéze na papíru.
Podrobnosti o biotechnologii Beijing Liuyi's membrána z acetátu celulózyelektroforetická nádrž a její aplikace elektroforézy naleznete zde:
lExperiment pro separaci sérového proteinu pomocí acetátové membrány celulózy
lMembránová elektroforéza s acetátem celulózy
lPři použití membránové elektroforézy s acetátem celulózy je třeba mít na paměti několik úvah (1)
Pokud máte nějaký plán nákupu pro naše produkty, neváhejte nás kontaktovat.Můžete nám poslat zprávu na email[e-mail chráněný]nebo[e-mail chráněný]nebo nám zavolejte na číslo +86 15810650221 nebo přidejte Whatsapp +86 15810650221 nebo Wechat: 15810650221.
Odkaz:Elektroforéza (druhé vydání) od pana Li
Čas odeslání: Jun-06-2023