Zavedení
Gelová elektroforéza je základní technika v molekulární biologii, široce používaná pro separaci proteinů, nukleových kyselin a dalších makromolekul. Správná kontrola objemu vzorku, napětí a doby elektroforézy je zásadní pro dosažení přesných a reprodukovatelných výsledků.Náš kolega z laboratoře nabízíosvědčené postupy pro řízení těchto parametrů během gelové elektroforézy SDS-PAGE.
Produkty pro gelovou elektroforézu Beijing Liuyi Biotechnology
Objem vzorku: Zajištění konzistence
Při provádění elektroforézy SDS-PAGE je objem vzorku klíčovým faktorem, který může významně ovlivnit rozlišení vašich výsledků. Obecně se doporučuje nanést 10 µl celkového proteinu na jamku. Pro zajištění konzistence a zabránění difúzi vzorku mezi sousedními jamkami je důležité vložit stejný objem 1x nanášecího pufru do všech prázdných jamek. Toto opatření pomáhá zabránit šíření vzorků do sousedních pruhů, ke kterému může dojít, pokud je studna prázdná.
Před vložením vzorků vždy začněte přidáním markeru molekulové hmotnosti do jedné jamky. To umožňuje snadnou identifikaci velikosti proteinů po elektroforéze.
Řízení napětí: Vyrovnávání rychlosti a rozlišení
Napětí aplikované během elektroforézy přímo ovlivňuje jak rychlost, kterou vzorky migrují gelem, tak rozlišení separace. U SDS-PAGE je vhodné začít s nízkým napětím kolem 80V. Toto počáteční nízké napětí umožňuje vzorkům migrovat pomalu a rovnoměrně a při vstupu do separačního gelu je koncentrovat do ostrého pásu.
Jakmile vzorky zcela vstoupí do separačního gelu, lze napětí zvýšit na 120V. Toto vyšší napětí urychluje migraci a zajišťuje, že proteiny jsou účinně separovány podle jejich molekulové hmotnosti. Je nezbytné sledovat postup čela barviva bromfenolové modři, který indikuje dokončení elektroforézy. Pro gely s koncentrací 10-12% obvykle postačuje 80-90 minut; u 15% gelů však možná budete muset dobu zpracování mírně prodloužit.
Time management: Vědět, kdy přestat
Načasování je dalším kritickým faktorem při gelové elektroforéze. Příliš dlouhé nebo příliš krátké působení gelu může vést k suboptimálnímu oddělení. Migrace barviva bromfenolové modři je užitečným indikátorem: když dosáhne dna gelu, je obvykle čas zastavit běh. Pro standardní gely, jako je 10-12%, je doba elektroforézy přibližně 80-90 minut typicky adekvátní. U gelů s vyšším procentem, jako je 15 %, by měla být doba zpracování prodloužena, aby se zajistilo úplné oddělení proteinů.
Správa vyrovnávací paměti: Opakované použití a příprava vyrovnávací paměti
Elektroforetický pufr lze znovu použít 1-2krát v závislosti na specifických podmínkách vaší laboratoře. Pro optimální výsledky se však doporučuje připravit čerstvý 10x pufr a těsně před použitím jej naředit. To zajišťuje, že si pufr zachová svou účinnost, což vede ke spolehlivějším výsledkům elektroforézy.
Produkty pro gelovou elektroforézu Beijing Liuyi Biotechnology
Pečlivým řízením objemu vzorku, napětí a doby elektroforézy můžete výrazně zlepšit přesnost a reprodukovatelnost výsledků gelové elektroforézy. Implementace těchto osvědčených postupů ve vaší laboratorní práci vám pomůže dosáhnout jasnějších a zřetelnějších pásem, což povede k lepším datům pro následnou analýzu.
Máte-li více dobrých metod k optimalizaci experimentu gelové elektroforézy, vítáme vás a diskutujte s námi!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) se specializuje na výrobu elektroforézních přístrojů již více než 50 let s naším vlastním profesionálním technickým týmem a R&D centrem. Máme spolehlivou a kompletní výrobní linku od návrhu po kontrolu a sklad, stejně jako marketingovou podporu. Mezi naše hlavní produkty patří elektroforézní cela (nádrž/komora), napájecí zdroj pro elektroforézu, modrý LED transiluminátor, UV transiluminátor, gelový obrazový a analytický systém atd. Dodáváme také laboratorní přístroje, jako je PCR přístroj, vortex mixer a centrifuga pro laboratoř.
Pokud máte nějaký plán nákupu pro naše produkty, neváhejte nás kontaktovat. Můžete nám poslat zprávu na email[e-mail chráněný]nebo[e-mail chráněný]nebo nám zavolejte na číslo +86 15810650221 nebo přidejte Whatsapp +86 15810650221 nebo Wechat: 15810650221.
Naskenujte prosím QR kód pro přidání na Whatsapp nebo WeChat.
Čas odeslání: 20. srpna 2024