Princip
Elektroforéza na filmu z acetátu celulózy je metoda elektroforézy využívající film z acetátu celulózy jako nosič. Jev, při kterém se nabité částice pohybují směrem k opačné elektrodě působením elektrického pole, se nazývá elektroforéza. Protože každý protein má specifický izoelektrický bod, pokud je protein umístěn do roztoku s pH nižším, než je jeho izoelektrický bod, protein bude kladně nabitý a bude se pohybovat směrem k záporné elektrodě. Naopak se posouvá ke kladnému pólu. Protože rychlost molekul proteinů pohybujících se v elektrickém poli souvisí s jejich nábojem, tvarem a velikostí molekul, lze různé proteiny oddělit elektroforézou. Sérum obsahuje různé proteiny, z nichž všechny mají izoelektrické body při pH 7,5 nebo nižším. Když je sérum umístěno do pufru o pH 8,6 za účelem provedení elektroforézy, všechny sérové proteiny jsou záporně nabité a budou se pohybovat směrem ke kladné straně v elektrickém poli. Vzhledem k tomu, že různé sérové proteiny mají různé náboje při stejném pH, molekulární částice mají různou velikost, a tedy i rychlost migrace je různá a jsou separovány elektroforézou. Izoelektrické body a molekulové hmotnosti sérových proteinů jsou uvedeny v tabulce níže:
| Protein | Izoelektrické body (PI) | Molekulová hmotnost |
| albumin | 4,88 | 69 000 |
| a1-gloulin | 5,00 | 200 000 |
| α2-gloulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulin | 5.12 | 9 000 až 150 000 |
| y-gloulin | 6,85~7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
Experimentem je separace různých proteinů v krevním séru s membránou z acetátu celulózy (zkr. CAM) jako podpůrným médiem. CAM je druh pěnového loosefilm s dobrou rovnoměrností a tloušťka je 0,1 mm-1,5 mm, která má určitou absorpci vody.
Materiály, nástroje a činidla pro CAM elektroforézu
ukázky:zdravé lidské krevní sérum
Nástroj:napájecí zdroj DYY-6C, elektroforetická nádrž DYCP-38C, vynikající nakládání vzorků WD-9404
Činidla
1) membrána z acetátu celulózy 7X9 cm
2) PH 8,6 barbitolový tlumivý roztok (iontová síla 0,05-0,09, to je čas 0,06 tid.): vezměte 1,84 g kyseliny diethylbarbiturové a poté vezměte 1,03 g diethyl pentobarbitalu sodného, přidejte trochu destilované vody, aby se zahřála, a připravte až 1000 ml;
3) Skvrna: Ponceau S 0,2 g, trichloroctová 3 g, přidejte 100 ml destilované vody;
4) TBS/T nebo PBS/T: 45 ml 95% ethanolu, 5 ml ledové kyseliny octové, přidat 50 ml destilované vody;
5) Čistící roztok: 70 ml bezvodého ethanolu, 30 ml ledové kyseliny octové.
Experiment Method
1) Připravte membránu: Ponořte membránu do barbitolového tlumivého roztoku na 30 min-8h a vyjměte ji, extra roztok odstraňte savým papírem.
2) Vkládání vzorků: Rozlište drsnou a hladkou stranu membrány a označte čáru ve vzdálenosti 1,5 cm od horního konce na hrubé straně. Vložte vzorky pomocí špičkového nástroje pro vkládání vzorků na hrubou stranu. Poznámka: Vzorky by měly být vloženy na drsnou stranu membrány. Poté, co vzorky séra zcela proniknou do membrány, otočte membránu, přiložte drsnou stranu (se vzorky) lícem dolů k nádrži a konec se vzorky vložte do negativní elektrody.
3) Elektroforéza: Zapněte napájení, 0,4～0,6m A/cm membrána, doba chodu je 30-45 min. Po provedení elektroforézy vypněte napájení.
4) Skvrna a čištění: Vyjměte membránu z nádrže a ponořte jiit do roztoku barviva po dobu 5 minut a poté jej čistěte v čisticím roztoku znovu a znovu 3-4krát, dokud není barva pozadí jasná. Sérové proteiny by měly být zobrazeny na proužcích a normálně existuje pět zón, od horního konce k vyznačené linii, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Konzervace: vložte suchou elektroforézukapelav čisticím roztoku po dobu 10-15 minut a poté jej vyjměte a nalepte na čistou sklenici, po zaschnutí se z ní stane průhledný filmkapela.
ExperimentovatVýsledek
Separační efekt vzorků séra je dobrý a nedochází k žádnému jevu zužování pásů. Opakovatelnost výsledků se liší v závislosti na zkušebních postupech a metodách experimentátora a opakovatelnost je vysoká.
Závěr
Systém rychlé detekce klinické elektroforézy (Nádrž pro elektroforézuDYCP-38C,napájeníDYY-6C a vynikající nakládání vzorků WD-9404) vyráběné naší společnostíspolečnost Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdsplňuje experimentální požadavky,avýsledky jsou reprodukovatelné, jednoduché a rychlé, vhodné provýukavýzkum.
Peking LiuyiBiotechnology Co., Ltd se specializuje na výrobu produktů elektroforézy pro průmysl věd o živé přírodě, kterýmá více než 50letou historii v Číně a společnost může poskytovat stabilní a vysoce kvalitní produkty po celém světě. Během let vývoje stojí za vaši volbu!
Nyní hledáme partnery, vítáme jak OEM elektroforézu, tak distributory.
Pro více informací o nás nás prosím kontaktujte emailem[e-mail chráněný]nebo[e-mail chráněný].
Čas odeslání: 14. listopadu 2022