Gelová elektroforéza je jednou z hlavních metod používaných v molekulární biologii pro analýzu DNA. Tato metoda zahrnuje migraci fragmentů DNA přes gel, kde jsou separovány na základě velikosti nebo tvaru. Setkali jste se však někdy při svých elektroforézních experimentech s nějakými chybami, jako jsou rozmazané pruhy na agarózovém gelu nebo žádné pruhy na gelu? Co může být příčinou těchto chyb?
Naši technici zde pro vaši referenci shrnuli několik řešení problémů.
1. Namazané pruhy na agarózovém gelu
●DNA byla degradována. Zabraňte kontaminaci nukleázou.
● Elektroforetický pufr není čerstvý. Po opakovaném použití elektroforetického pufru se iontová síla snižuje a jeho hodnota pH se zvyšuje, takže kapacita pufru slábne, což ovlivňuje účinek elektroforézy. Doporučuje se často měnit elektroforetický pufr.
● Byly použity nevhodné podmínky elektroforézy. Nedovolte, aby napětí přesáhlo 20 V/cm a během elektroforézy udržujte teplotu <30°C. Pro elektroforézu obřího řetězce DNA by teplota měla být <15° C. Zkontrolujte, zda má pufr pro elektroforézu dostatečnou kapacitu pufru.
● Na gel bylo naneseno příliš mnoho DNA. Snižte množství DNA.
● Příliš mnoho soli v DNA. Pro pokročilé odstranění přebytečných solí použijte srážení ethanolem.
● DNA byla kontaminována proteinem. Pro pokročilé odstranění bílkovin použijte extrakci fenolem.
● DNA byla denaturována. Před elektroforézou nezahřívejte. Zřeďte DNA v pufru s 20 mM NaCl.
2. Anomálie migrace pásu DNA
• Renaturace COS místa fragmentu λHind III. Před elektroforézou zahřívejte DNA po dobu 5 minut při teplotě 65 °C a poté ji 5 minut chlaďte na jednotce s ledem.
● Byly použity nevhodné podmínky elektroforézy. Nedovolte, aby napětí přesáhlo 20 V/cm a během elektroforézy udržujte teplotu <30°C. Zkontrolujte, zda má pufr pro elektroforézu dostatečnou kapacitu pufru.
● DNA byla denaturována. Před elektroforézou nezahřívejte. Zřeďte DNA v pufru s 20 mM NaCl.
3. Slabé nebo žádné pruhy DNA na agarózovém gelu
● Na gelu nebylo naneseno dostatečné množství nebo koncentrace DNA. Zvyšte množství DNA. Elektroforéza na polyakrylamidovém gelu je o něco citlivější než elektroforéza na agaróze a zatížení vzorku lze vhodně snížit.
● DNA byla degradována. Zabraňte kontaminaci nukleázou.
● DNA byla elektroforézována z gelu. Elektroforézujte gel po kratší dobu, použijte nižší napětí nebo gel s vyšším procentem.
● K vizualizaci DNA obarvené ethidium bromidem byl použit nesprávný zdroj světla W. Pro vyšší citlivost použijte krátkovlnné (254 nm) W světlo.
4. Chybí pruhy DNA
●Malá DNA byla elektroforézována z gelu. Elektroforézujte gel po kratší dobu, použijte nižší napětí nebo gel s vyšším procentem.
● Obtížné rozlišit pásy DNA podobných molekul. Prodlužte dobu elektroforézy a zkontrolujte koncentracigelu, abyste se ujistili, že se použije správné procento gelu.
● DNA byla denaturována. Před elektroforézou nezahřívejte. Zřeďte DNA v pufru s 20 mM NaCl.
● Řetězce DNA jsou obrovské a konvenční gelová elektroforéza není vhodná. Analyzujte pomocí pulzní gelové elektroforézy.Jaké další problémy jste měli s elektroforézou na agarózovém gelu? V budoucnu budeme více hledat průvodce.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) je specializovaná společnost se zaměřením na produkty související s elektroforézou v Číně. Její příběh začíná v roce 1970, kdy Čína ještě nevstoupila do reformy a otevírání se času. Během let vývoje má Liuyi Bitotech svou vlastní značku, která je na domácím trhu s produkty pro elektroforézu známá jako značka Liuyi.
Značka Liuyi má v Číně více než 50letou historii a společnost může poskytovat stabilní a vysoce kvalitní produkty po celém světě. Díky letitému vývoji si zaslouží vaši volbu!
Horizontální elektroforézní články (nádrže/komory) Liuyi Biotech jsou vysoce kvalitní a mají dobrý vzhled. S různými velikostmi gelových tácků mohou splnit vaše různé experimentální požadavky. Máme vlastní technický tým a továrnu. Od návrhu po výrobu, suroviny až po klíčové části, můžeme řídit celý proces. Řada DYCP 31 je určena pro elektroforézu DNA, které jsou modelovéDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DNaDYCP-31E. Rozdíly mezi nimi jsou velikosti gelu a cena. Pro naše zákazníky poskytujeme produkty v plné velikosti. ModelkaDYCP-32Cdokáže vyrobit největší gel 250 mm * 250 mm.
Mezitím doporučujeme náš napájecí zdroj pro elektroforézuDYY-6C,DYY-6DaDYY-10Cpro naše elektroforetické články (nádrže/komory) řady DYCP-31 a 32.
Pokud chcete více informací o produktech, navštivte prosím tuto webovou stránku, kde získáte další informace, a kontaktujte nás prostřednictvím e-mailu, abyste nám dali vědět, co chcete, a zjistili, zda vám můžeme poskytnout řešení.
Pro více informací o nás nás prosím kontaktujte emailem[e-mail chráněný], [e-mail chráněný].
Čas odeslání: květen-09-2022