Comet Assay: Citlivá technika pro detekci poškození a opravy DNA

Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) je citlivá a rychlá technika primárně používaná k detekci poškození DNA a opravy v jednotlivých buňkách. Název „Comet Assay“ pochází z charakteristického tvaru komety, který se objevuje ve výsledcích: jádro buňky tvoří „hlavu“, zatímco poškozené fragmenty DNA migrují a vytvářejí „ocas“ připomínající kometu.

Princip

Princip Comet Assay je založen na migraci fragmentů DNA v elektrickém poli. Neporušená DNA zůstává uvnitř buněčného jádra, zatímco poškozená nebo fragmentovaná DNA migruje směrem k anodě a tvoří „ohon komety“. Délka a intenzita ocasu jsou přímo úměrné rozsahu poškození DNA.

Postup

1. Příprava buněk: Testované buňky se smíchají s agarózou s nízkým bodem tání a nanesou na mikroskopická sklíčka tak, aby vytvořily jednotnou vrstvu.
2. Buněčná lýza: Sklíčka se ponoří do lyzačního roztoku, aby se odstranila buněčná membrána a jaderná membrána, čímž se obnaží DNA.
3. Elektroforéza: Sklíčka se umístí do elektroforetické komory v alkalických nebo neutrálních podmínkách. Poškozené fragmenty DNA migrují směrem ke kladné elektrodě pod vlivem elektrického pole.
4. Barvení: Po elektroforéze se sklíčka obarví fluorescenčním barvivem (např. ethidium bromidem), aby se zviditelnila DNA.
5. Mikroskopická analýza: Pomocí fluorescenčního mikroskopu nebo specializovaného softwaru se analyzují tvary komety a měří se parametry, jako je délka ocasu a intenzita.

Obrázek z biorenderu

Analýza dat

Výsledky z Comet Assay jsou hodnoceny na základě několika klíčových parametrů:

• Délka ocasu: Představuje vzdálenost, kterou DNA migruje, indikující rozsah poškození DNA.
• Obsah DNA ocasu: Procento DNA, které migruje do ocasu, často používané jako kvantitativní měřítko poškození DNA.
• Olive Tail Moment (OTM): Kombinuje jak délku ocasu, tak obsah DNA ocasu, aby poskytl komplexnější míru poškození DNA.

Aplikace

1. Studie genotoxicity: Comet Assay se široce používá k hodnocení účinků chemikálií, léků a záření na buněčnou DNA, což z něj činí klíčový nástroj pro testování genotoxicity.
2. Environmentální toxikologie: Pomáhá při analýze dopadu látek znečišťujících životní prostředí na DNA organismů a poskytuje pohled na bezpečnost ekosystémů.
3. Lékařský a klinický výzkum: Comet Assay se používá při studiu mechanismů opravy DNA, rakoviny a dalších onemocnění souvisejících s DNA. Hodnotí také dopad terapií rakoviny, jako je radioterapie a chemoterapie, na DNA.
4. Vědy o potravinářství a zemědělství: Používá se k hodnocení bezpečnosti pesticidů, potravinářských přídatných látek a dalších látek a ke studiu jejich toxických účinků na zvířecích modelech.

Výhody

• Vysoká citlivost: Schopný detekovat nízké úrovně poškození DNA.
• Jednoduchá obsluha: Tato technika je přímočará, takže je vhodná pro vysoce výkonný screening.
• Široká aplikace: Může být aplikován na různé typy buněk, včetně živočišných a rostlinných buněk.
• Kvantifikační výzvy: Zatímco poskytuje kvalitativní data o poškození DNA, kvantitativní analýza se do značné míry opírá o software a techniky analýzy obrazu.
• Experimentální podmínky: Výsledky mohou být ovlivněny faktory, jako je doba elektroforézy a pH, které vyžadují pečlivou kontrolu experimentálních podmínek.

Omezení

Comet Assay je neocenitelným nástrojem v biomedicínském výzkumu, environmentální vědě a vývoji léků díky své flexibilitě a vysoké citlivosti při zjišťování poškození a oprav DNA. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)nabízí horizontální elektroforézní komoru pro kometový test. Vítejte, kontaktujte nás, abyste diskutovali oKometový testprotokol.

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) se specializuje na výrobu elektroforézních přístrojů již více než 50 let s naším vlastním profesionálním technickým týmem a R&D centrem. Máme spolehlivou a kompletní výrobní linku od návrhu po kontrolu a sklad, stejně jako marketingovou podporu. Mezi naše hlavní produkty patří elektroforézní cela (nádrž/komora), napájecí zdroj pro elektroforézu, modrý LED transiluminátor, UV transiluminátor, gelový obrazový a analytický systém atd. Dodáváme také laboratorní přístroje, jako je PCR přístroj, vortex mixer a centrifuga pro laboratoř.

Pokud máte nějaký plán nákupu pro naše produkty, neváhejte nás kontaktovat. Můžete nám poslat zprávu na email[e-mail chráněný]nebo[e-mail chráněný]nebo nám zavolejte na číslo +86 15810650221 nebo přidejte Whatsapp +86 15810650221 nebo Wechat: 15810650221.

Naskenujte prosím QR kód pro přidání na Whatsapp nebo WeChat.