Příprava vzorku aNačítání
Vzhledem k použití kontinuálního pufrovacího systému bez stohovacího gelu ve většině případů by vzorky měly mít vhodnou koncentraci a malý objem. Použijte apipetapomalu přidávejte vzorek s 5-10 μg na jamku, aby se zabránilo významnému snížení rozlišení. Kdyžnačítání vzorku, musí být vypnuto napájení. Vzorek by měl obsahovat indikátorové barvivo (0,025 % bromfenolová modř nebo oranžová) a sacharózu (10-15 %) nebo glycerol (5-10 %) pro zvýšení jeho hustoty, koncentraci vzorku a zabránění difúzi. Někdy však sacharóza nebo glycerol mohou ve výsledcích elektroforézy způsobit pásy ve tvaru U, čemuž se lze vyhnout použitím 2,5% Ficoll (polyvinylpyrrolidon).
Elektroforéza
Napětí pro elektroforézu je 5-15 V/cm, obecně kolem 10 V/cm. Pro separaci velkých molekul by mělo být napětí nižší, obvykle nepřesahující 5 V/cm.
Barvení
Fluorescenční barvivo ethidium bromid (EB) se běžně používá k barvení k pozorování pásů DNA v agarózovém gelu. EB se může vložit mezi páry bází molekul DNA, což způsobí, že se EB naváže na DNA. Absorpce ultrafialového světla o vlnové délce 260 nm DNA se přenese na EB a navázaný EB emituje fluorescenci při 590 nm v červeno-oranžové oblasti spektra viditelného světla. Barvení gelu v roztoku 1 mmol/l MgSO4 po dobu 1 hodiny může snížit fluorescenci pozadí způsobenou nenavázaným EB, což usnadňuje detekci malého množství DNA.
EB barvivo má několik výhod: snadno se používá, neštěpí nukleové kyseliny, má vysokou citlivost a může barvit DNA i RNA. EB lze kdykoli přidat ke vzorku a sledovat pomocí UV absorpce. Po obarvení lze EB odstranit extrakcí n-butanolem.
EB barvivo je však silný mutagen a při manipulaci je třeba dodržovat opatření, jako je nošení polyetylenových rukavic. Akridinová oranž je také běžně používané barvivo, protože dokáže odlišit jednovláknové a dvouvláknové nukleové kyseliny (DNA, RNA). Vykazuje zelenou fluorescenci (530 nm) pro dvouvláknové nukleové kyseliny a červenou fluorescenci (640 nm) pro jednovláknové nukleové kyseliny. Kromě toho lze pro barvení použít další barviva, jako je methylenová modř, methylenová zeleň a chinolin B.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) se specializuje na výrobu elektroforézních přístrojů již více než 50 let s naším vlastním profesionálním technickým týmem a R&D centrem. Máme spolehlivou a kompletní výrobní linku od návrhu po kontrolu a sklad, stejně jako marketingovou podporu. Naše hlavní produkty jsou elektroforézní cela (nádrž/komora), elektroforézní napájecí zdroj, modrý LED transiluminátor, UV transiluminátor, gelový obrazový a analytický systém atd.
Nyní hledáme partnery, vítáme jak OEM elektroforézu, tak distributory.
Pokud máte nějaký plán nákupu pro naše produkty, neváhejte nás kontaktovat. Můžete nám poslat zprávu na email[e-mail chráněný]nebo[e-mail chráněný]nebo nám zavolejte na číslo +86 15810650221 nebo přidejte Whatsapp +86 15810650221 nebo Wechat: 15810650221.
Naskenujte prosím QR kód pro přidání na Whatsapp nebo WeChat.
Čas odeslání: 20. prosince 2023