1. Klasifikace
Gelová elektroforéza se dělí na vertikální typy (včetně sloupcových gelů a deskových gelů) a horizontální typy (hlavně deskové gely) (obrázek 6-18). Obecně je vertikální separace o něco lepší než horizontální, ale horizontální gelová příprava má alespoň čtyři výhody: pod celým gelem je podpěra, což umožňuje použití agarózy s nízkou koncentrací; je možné připravit plotny s agarózovým gelem různých specifikací; příprava gelu a nanášení vzorku jsou pohodlnější; elektroforetická komora se snadno zkonstruuje a je nákladově efektivní. Protože se horizontální elektroforéza provádí s agarózovou gelovou destičkou zcela ponořenou asi 1 mm pod povrchem elektroforetického pufru, nazývá se také ponořená elektroforéza.
Elektroforéza Tank DYCP-31DN pro elektroforézu na agarózovém gelu
2. Systém vyrovnávací paměti
Při separaci nukleových kyselin používá většina systémů kontinuální systémy. Běžně používané elektroforézní pufry zahrnují TBE (0,08 mol/l Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/l kyselina boritá, 0,0024 mol/l EDTA) pufr a THE (0,04 mol/l Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/l octan sodný, 0,0018 mol/l EDTA) pufr. Tyto pufry se obecně připravují jako 10x zásobní roztoky a při použití se ředí na požadovanou koncentraci. Rychlosti migrace lineární a cirkulární DNA v agarózovém gelu se liší podle použitého pufru. V pufru THE je rychlost migrace lineární DNA vyšší než u kruhové DNA, zatímco v pufru TBE je tomu naopak.
3.Příprava agarózového gelu
(1) Příprava horizontálního agarózového gelu
(a) Připravte požadovanou koncentraci agarózového gelu pomocí 1x elektroforetického pufru.
(b) Zahřejte agarózu do úplného rozpuštění buď ve vroucí vodní lázni, na magnetickém míchadle nebo v mikrovlnné troubě. Roztok agarózy se ochladí na 55 °C a přidá se ethidium bromidové (EB) barvivo do konečné koncentrace 0,5 μg/ml.
(c) Utěsněte okraje skleněných nebo akrylových destiček malým množstvím agarózového gelu, přidejte hřeben a umístěte hřebenové zuby asi 0,5~1,0 mm nad destičku.
(d) Rozpuštěný roztok agarózového gelu kontinuálně nalévejte do skleněné nebo akrylové destičkové formy (tloušťka závisí na objemu vzorku DNA), aby se zabránilo vniknutí vzduchových bublin. Necháme přirozeně ztuhnout při pokojové teplotě.
(e) Po úplném ztuhnutí hřeben opatrně vyjměte. Přidejte vhodné množství elektroforetického pufru do gelové nádrže a ujistěte se, že gelová destička je ponořena asi 1 mm pod povrch elektroforetického pufru.
(2) Příprava vertikálního agarózového gelu
(a) Odstraňte mastnotu nebo zbytky ze skleněných desek omytím etanolem.
(b) Umístěte distanční destičky mezi přední a zadní přepážky, zarovnejte okraje distančních destiček s přední a zadní přepážkou a zajistěte je svorkami.
(c) Přidejte 2 % agarózy v 1x pufru mezi okraje distančních destiček, aby se vytvořila 1 cm vysoká agarózová zátka na dně komory pro odlévání gelu.
(d) Nalijte rozpuštěný agarózový gel v požadované koncentraci, připravený v 1x pufru, do gelové komory až 1 cm pod vršek.
(e) Vložte hřeben, vyhněte se zachycení vzduchových bublin pod hřebenovými zuby. Někdy se mohou objevit vrásky na hřebenových zubech během chlazení agarózového gelu; v takových případech jednoduše přidejte navrch trochu rozpuštěné agarózy, aby ztuhla.
(f) Odstraňte hřeben. Abyste zabránili úniku pufru v plnicím otvoru, utěsněte spojení mezi destičkou s agarózovým gelem a komůrkou pro elektroforézu 2% agarózou a přidejte požadované množství pufru.
(g) Přidejte 1x elektroforetický pufr do gelové komory.
(h) Opatrně naneste vzorky DNA na agarózový gel pod pufrem.
Více informací o základních znalostech o elektroforéze na agarózovém gelu sdělíme příští týden. Kéž by tyto informace byly užitečné pro váš experiment.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) se specializuje na výrobu elektroforézních přístrojů již více než 50 let s naším vlastním profesionálním technickým týmem a R&D centrem. Máme spolehlivou a kompletní výrobní linku od návrhu po kontrolu a sklad, stejně jako marketingovou podporu. Naše hlavní produkty jsou elektroforézní cela (nádrž/komora), elektroforézní napájecí zdroj, modrý LED transiluminátor, UV transiluminátor, gelový obrazový a analytický systém atd.
Nyní hledáme partnery, vítáme jak OEM elektroforézu, tak distributory.
Pokud máte nějaký plán nákupu pro naše produkty, neváhejte nás kontaktovat. Můžete nám poslat zprávu na email[e-mail chráněný]nebo[e-mail chráněný]nebo nám zavolejte na číslo +86 15810650221 nebo přidejte Whatsapp +86 15810650221 nebo Wechat: 15810650221.
Naskenujte prosím QR kód pro přidání na Whatsapp nebo WeChat.
Čas odeslání: prosinec-07-2023